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鑒別ATCC細(xì)胞株真?zhèn)蔚姆椒?/h1>
更新時(shí)間:2017-11-28      點(diǎn)擊次數(shù):2505
   鑒別ATCC細(xì)胞株真?zhèn)蔚姆椒?div>  ATCC細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為ATCC細(xì)胞株,也就是說(shuō),ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。ATCC細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
  原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細(xì)胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細(xì)胞系,培養(yǎng)50代以上并無(wú)限培養(yǎng)下去。 所以ATCC細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來(lái)講,可培養(yǎng)到40-50代。ATCC細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
  鑒別ATCC細(xì)胞株真?zhèn)蔚姆椒ǎ?/div>
  一.利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ATCC細(xì)胞株是否檢測(cè)目的抗原,方法如下:
  (1) 將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody: antigen≈1:2的混合孵育液(2) 37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體(3) 后續(xù)操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物(4) 實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說(shuō)明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ATCC細(xì)胞株。 (5) 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)線性,則說(shuō)明試劑盒檢測(cè)抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測(cè)作用,則該試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是目的抗原。
  二. 如果購(gòu)買了兩盒同一公司的ATCC細(xì)胞株A和B,利用交叉實(shí)驗(yàn)即可辨別ATCC細(xì)胞株是否造假,方法如下:
  (1) 取出購(gòu)買的試劑盒A的包被板兩條。
  (2) 一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  (3) 另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  (4) 后續(xù)操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物。
  (5) 實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測(cè)兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說(shuō)明兩個(gè)ATCC細(xì)胞株檢測(cè)的同一個(gè)指標(biāo)而非A和B,即該試劑盒為偽劣假造ATCC細(xì)胞株。
  (6) 如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說(shuō)明兩個(gè)ATCC細(xì)胞株檢測(cè)的不同指標(biāo),試劑盒A只能檢測(cè)A,不能檢測(cè)B,即該試劑盒為正常的ATCC細(xì)胞株。

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